U(kuò)增子引物.svg)
介紹
多重PCR（Multiplex Polymerase Chain Reaction，mPCR）技術(shù)是一種在單一PCR反應(yīng)中同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)靶序列的核酸檢測(cè)技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)自1988年首次提出以來(lái)，因其高效性、高通量和低成本的特點(diǎn)，在科學(xué)研究和疾病診斷等多個(gè)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。
雖然在多重PCR中能夠快速經(jīng)濟(jì)地對(duì)多個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，但同時(shí)也面臨著一些挑戰(zhàn)，如引物設(shè)計(jì)、反應(yīng)條件優(yōu)化、非特異性擴(kuò)增和引物二聚體等問(wèn)題。這就需要在設(shè)計(jì)引物時(shí)，對(duì)引物的特異性、長(zhǎng)度、GC含量、退火溫度等進(jìn)行精心設(shè)計(jì)和優(yōu)化，以確保每對(duì)引物都能均衡地?cái)U(kuò)增目標(biāo)片段。
Multibaits 通過(guò)生成盡量多的引物序列，多種指標(biāo)篩選后得到質(zhì)量合格引物，后通過(guò)最新的二聚體理論和退火優(yōu)化算法得到更好的引物組合。
流程概要
流程主要包括三個(gè)階段：生成引物，篩選引物，所有引物組合。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 專(zhuān)業(yè)的設(shè)計(jì)工具得到最優(yōu)的多重引物設(shè)計(jì)；
2. 低堿基錯(cuò)誤率工藝合成多重引物，確保高的擴(kuò)增效率和低的非特異性擴(kuò)增；
3. 引物自動(dòng)化定量分裝混合，定量準(zhǔn)確、混合均一；
4. 擴(kuò)增體系支持最多擴(kuò)增7000重；
5. 針對(duì)極個(gè)別位點(diǎn)會(huì)出現(xiàn)難覆蓋給出相應(yīng)的策略進(jìn)行解決，提高位點(diǎn)覆蓋率。
多重PCR 反應(yīng)技術(shù)路線(xiàn)：兩輪擴(kuò)增
第一輪 -- 對(duì)多個(gè)目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增，得到擴(kuò)增子產(chǎn)物
第二輪 -- 擴(kuò)增加上測(cè)序接頭
針對(duì)個(gè)別位點(diǎn)難覆蓋的策略
1. 免費(fèi)設(shè)計(jì)新引物進(jìn)行原有引物的替換和測(cè)試，解決引物擴(kuò)增效果差、位點(diǎn)未覆蓋的問(wèn)題。
2. 某些重要位點(diǎn)經(jīng)過(guò)反復(fù)多次優(yōu)化后可能仍然無(wú)法被覆蓋，將未覆蓋位點(diǎn)的引物挑選出來(lái)單獨(dú)擴(kuò)增，之后合并。用于必須要檢出的目標(biāo)位點(diǎn)。
多重引物設(shè)計(jì)
設(shè)計(jì)報(bào)告
多重?cái)U(kuò)增子引物設(shè)計(jì)工具鏈接：
多重?cái)U(kuò)增實(shí)例：132重
1. 比對(duì)率：Clean data 比對(duì)到參考基因組上的數(shù)據(jù)占比；
2. On_target：比對(duì)到目標(biāo)區(qū)域的Read 數(shù)與比對(duì)到參考基因組上Read 數(shù)的比例；
3. 0.20*mean：目標(biāo)區(qū)域內(nèi)，測(cè)序深度達(dá)到平均測(cè)序深度的20% 區(qū)域占目標(biāo)區(qū)域的比例。
整體解決方案
1. 人的多重?cái)U(kuò)增子測(cè)序可以設(shè)計(jì)、合成、擴(kuò)增、測(cè)序驗(yàn)證；
2. 病原tNGS，客戶(hù)提供病原參考序列，可以設(shè)計(jì)+合成，客戶(hù)端測(cè)序驗(yàn)證。
